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产品内容：
产品说明：
该酶在75℃时可进行DNA复制，Pfu DNA聚合酶在镁存在的条件下可催化核苷酸沿5’→3’方向发生聚合反应，形成双链DNA，Pfu DNA聚合酶具有3’→ 5’外切酶校正活性。当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。本产品在所有热稳定性聚合酶中Pfu DNA聚合酶的错误几率最低，错误率约为1×10-6/每碱基对，缺点是PCR扩增灵敏度较Taq低。建议Pfu DNA聚合酶用于要求保真度比较高的PCR反应，引物的延伸反应以及其它一些应用，包括克隆、DNA表达、突变分析等。Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平端，无末端磷酸化。若要进行“T-A”克隆，可在PCR反应完了之后，加入Taq DNA聚合酶，于72℃反应1～2小时，以便在DNA 3’端附加一个“A”。
产品来源：
为重组E.coli菌株，其基因组中含有来源于Pyrococcus furiosus的Pfu DNA polymerase基因。
活性定义：
在75℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个活性单位。
贮存条件：
10mM Tris-HCl (pH8.2,25℃),0.1mM EDTA，1mM DTT,0.1% Tween -20,0.1%Igepal
反应条件：
20mM Tris-HCl (Ph8.6,25℃),10mM KCl,16mM (NH4)2SO4,2mM MgSO4,1mg/ml BSA,0.1% Triton X-100
热失活：无
质量保证：
本品经PCR验证，活性测定，内切核酸酶/缺刻酶测定和SDS-PAGE纯度鉴定。保证产品的质量稳定可靠。
使用注意：
除了酶活性丧失外，下列因素也可能导致扩增失败：(1)模板太多或太少(2)样品中存在Mg²⁺络合剂，导致Mg²⁺实际浓度过低(3)PCR仪温度不准(4)临床来源的样品中含有未知的Pfu DNA聚合酶抑制剂(5)引物部分降解(6) dNTP部分降解等。建议:每50微升反应体系中，酶用量为0.5～1微升最好，酶量少可能扩增效率低下，使用时请注意!
用途：
1.基因亚克隆的PCR扩增。
2.蛋白质表达载体的构建。
3.突变体的制备。
反应举例：
以下举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需要根据模板、目的片段的大小、碱基序列、引物长短等具体情况，设定最佳反应条件。
以人基因组为模板，扩增1kb的片段为例。
1.PCR反应体系的建立，50μL体系如下：(可按比例放大或缩小体系)
2.PCR反应循环的设置：
3.结果检测：
反应结束后取5μL产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
相关搜索：Pfu DNA聚合酶，Pfu DNA polymerase